Sangerowanie sekwencyjne i generowanie myszy cz. 1

width=288Sekwencjonowanie Sanger przeprowadzono na analizatorze genetycznym ABI-A3500 i zastosowano zestaw do sekwencjonowania BigDye 3.1 (Applied Biosystems, California, USA).

Model myszy C57BL / 6 z mutacją punktową (około 41 T> C) w locus Xrcc2 wygenerowano przez mikroiniekcję CRISPR / Cas9 do zapłodnionych komórek jajowych (Cyagen, Chiny). Mysi gen Xrcc2 (numer dostępu w GenBank: NM_020570.2; Ensembl: ENSMUSG00000028933) był zlokalizowany na chromosomie 5qB1. Podstawową mutację c.T41 w dawcy oligo wprowadzono do eksonu 2 przez naprawę ukierunkowaną na homologię. MRNA Cas9, gRNA i dawca oligo zostały wspólnie wstrzyknięte do zygot dla produkcji myszy KI. Szczenięta genotypowano za pomocą PCR i sekwencjonowania Sangera przy użyciu genomowego DNA lub cDNA jako matrycy.
[hasła pokrewne: kreatynina egfr, krótkie wędzidełko napletka, kuzynka brzozy ]